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現代藥材鑒別技術(shù)

2024-05-17 11:40 作者: 網(wǎng)絡(luò )整理 12190瀏覽 0評論 0 0 舉報

中藥顯微鑒別技術(shù)_取樣、制片、染色

 

中藥的顯微鑒定法是利用顯微技術(shù)對中藥進(jìn)行顯微分析,以確定其品種和質(zhì)量的一種鑒定方法。顯微鑒定主要包括組織鑒定和粉末鑒定,利用顯微鏡來(lái)觀(guān)察藥材的組織構造、細胞形狀及內含物的特征、礦物的光學(xué)特性,和用顯微化學(xué)方法,確定細胞壁及細胞內含物的性質(zhì)或某些品種有效成分在組織中的分布等,用以鑒別藥材的真偽與純度甚至品質(zhì)。

 

一、取樣

取樣的代表性直接影響到結果的判斷準確,因此必須重視取樣的各個(gè)環(huán)節。

(一)對照品

對照品粉末是檢定供試品的參照物,其制備是顯微鑒別的先決條件。有經(jīng)驗者,可自取標本,鑒定后制作,或購買(mǎi)藥材經(jīng)品種基原鑒定。還應注意有些藥材的顯微特征受生長(cháng)年限及環(huán)境的影響,會(huì )產(chǎn)生一定的波動(dòng),所以對于供試品的產(chǎn)地、采收期、加工方法等也應當認真記錄。

(二)供試品

中藥材  原藥材應注意基原、產(chǎn)地、規格的完整性、清潔程度以及有無(wú)水跡、霉變或其他物質(zhì)污染等情況,并詳細記錄。

(1)從同批藥材包件中抽取有代表性的檢定用樣品。

(2)對破碎的、粉末狀的或大小在 1cm 以下的藥材,一般藥材 100g-500g;粉末狀藥材25g;貴重藥材5g-10g;個(gè)體大的藥材,根據實(shí)際情況抽取代表性的樣品。

(3)將所取有代表性樣品混合均勻,即為總樣品量。

(4)前處理:將供試品撿凈后,用量較小時(shí),可以用乳體或小型電磨粉碎過(guò)《中國藥典》6號篩(1.0μm-250μm)備用。

1、中成藥

(1)取樣:從各批號的箱、包、瓶中隨機取樣,記錄好廠(chǎng)家、批號,從各包裝盒中任意取1丸,每批號不得少于3次。各供試品留樣保存,保存期限至少1年。

水丸無(wú)包衣時(shí),可直接取2 丸-3 丸,乳缽中研成細粉后,取少量置裁玻片上,滴加規定的試液,攪拌均勻,使粘結的細胞、組織分離,再按粉末特征加水合氯醛試液或其他適當試液處理后觀(guān)察。

水蜜丸或大蜜丸;可直接用刀片橫向切開(kāi)取一薄片,或用小鋼鏟取一小塊(約15mg)放置在載玻片上制片觀(guān)察。

(1)去包衣:中藥片劑常見(jiàn)包衣為糖衣,隔離層常使用膠漿、糖漿和滑石粉。水丸和糊丸等(掛)衣的材料有滑石、蔗糖、朱砂、雄黃、青黛、百草霜、礞石、赫石等??捎玫镀瑢聞內?,簡(jiǎn)單的辦法也可將片劑或丸劑斷為兩半,直接取內心,粉碎進(jìn)行觀(guān)察。

(2)添加劑:為便于觀(guān)察,可對中成藥的制造過(guò)程中使用的添加劑做適當的前處理。

除去水溶性干擾物:將檢品置于蒸餾水中研勻,離心處理,取沉淀物檢查。

除去脂溶性干擾物:將檢品滴加適量氯仿,離心處理,取沉淀?yè)]干氯仿后檢查。

除去淀粉,糊化淀粉的干擾:將檢品滴加蒸餾水研勻,置燒杯中煮沸、冷卻,離心處理,取沉淀檢查。

以上操作中,為防止某些顯微特征的流失,應進(jìn)行留樣觀(guān)察。

二、制片

(一)制片

1、載玻片與蓋玻片  載玻片與蓋玻片是影響圖像質(zhì)量的因素之一。因載物臺下的聚光器是按使用一定厚度的載玻片設計的。首先應選擇規格統一的載玻片(厚0.9mm-1.2mm)與蓋玻片(厚0.12mm-0.17mm)。使用前,將載玻片與蓋玻片用無(wú)水乙醇浸泡后,用柔軟的綢布或無(wú)纖維人造紙揩擦,至表面潔凈無(wú)暇。

2、制片  將供顯微觀(guān)察的粉末藥材或樣品置于載玻片上,然后加入適宜的試液1滴,用玻璃棒攪勻,用鑷子將蓋玻片沿一側輕輕放下,使液體自然展勻即可??捎脼V紙吸拭溢出的液體或從蓋玻片邊緣補充液體不足的空隙。

(二)制片按使用試劑分類(lèi)

1、稀碘液制片  主要用于觀(guān)察含淀粉粒。

2、斯氏試液制片  試液由醋酸:甘油:水(1:1:1)組成。用于觀(guān)察包括淀粉粒在內的所有顯微鑒別特征。

3、水合氯醛制片  水合氯醛試液能滲透組織,使皺縮的細胞膨脹并能溶解淀粉粒、蛋白質(zhì)、樹(shù)脂、揮發(fā)油和葉綠素等,使細胞組織變得透明而清晰。

4、乙醇裝片  在觀(guān)察的切片中有菊糖、粘液、樹(shù)膠等時(shí),使用95%以上的乙醇。

(三)制片按保存時(shí)間分類(lèi)

1、臨時(shí)制片  封藏介質(zhì)一般為流動(dòng)性液體,不耐久藏。但制作簡(jiǎn)易、適用于一般的顯微觀(guān)察及顯微化學(xué)反應。

2、半永久性制片  在上述臨時(shí)制片周?chē)?,直接使用加拿大?shù)膠,將蓋玻片周?chē)鈬?,室溫放?1 天干燥后,置冰箱內,一般可供 10 年以上觀(guān)察使用。封藏介質(zhì)還可以選用半固體的甘油明膠。

3、永久性制片  封藏介質(zhì)一般呈固態(tài),可長(cháng)期保存,但制作費時(shí),多用于教學(xué)標本。制作方法一般是先將粉末用無(wú)水乙醇浸潤,隨后瀝去乙醇,用二甲苯浸潤,再瀝去二甲苯,滴加加拿大樹(shù)膠的二甲苯溶液后,自然揮發(fā)干燥固定后即可。

三、染色

為使標本片特征顯著(zhù),可根據細胞壁及細胞內含物的性質(zhì),加入不同染色劑染色。常見(jiàn)的顯微化學(xué)反應如下(所有試液的配制方法參見(jiàn)《中國藥典》)。

(一)細胞壁性質(zhì)的檢定

1、木化細胞壁,加間苯三酚試液1 滴-2 滴,稍放置,加鹽酸 1 滴,因木化程序不同,顯粉色、紅色或紫紅色。此操作最好在水合氯醛透化后再進(jìn)行,其效果較好。

2、木栓化或角質(zhì)化細胞壁,加蘇丹III 試液,稍放置或微熱,呈橘紅色至紅色。

3、纖維素細胞壁  加氯化鋅碘試液,或先加碘試液濕潤后,稍放置,再加硫酸溶液(33-50)顯藍色或紫色。

(二)細胞內含物性質(zhì)的檢定

1、淀粉粒  加稀碘試液,呈藍色或紫色。

2、糊粉粒  (1)加碘試液,呈黃棕色。(2)加硝酸汞試液,呈磚紅色(材

料中如含有多量脂肪油,宜先用乙醚或石油醚脫脂后進(jìn)行)。

3、脂肪油、揮發(fā)油和樹(shù)脂(1)加蘇丹 III 試液,呈橘紅色,紅色或紫紅色。(2)加90%乙醇、脂肪油和樹(shù)脂不溶解(蓖麻油及巴豆油例外),揮發(fā)油則溶解。

4、菊糖  加10%α-萘酚乙醇溶液,再加80%硫酸1滴-2滴,顯紫紅色并很快溶解。

5、粘液  加釕紅試液,呈紅色。

6、草酸鈣結晶  (1)加稀醋酸不溶解,加稀鹽酸即溶解但無(wú)氣泡發(fā)生。(2)加硫酸(1-2)逐漸溶解。片刻后析出針狀硫酸鈣結晶。

7、碳酸鈣(鐘乳體),加稀鹽酸溶解,同時(shí)有氣泡發(fā)生。

8、硅質(zhì)  加硫酸不溶解。

 

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